伏马毒素B1检测试剂盒使用说明书（酶联免疫法）

1. 原理与用途

伏马毒素（Fumonisins）是由串珠镰刀菌所产生的一种真菌毒素，目前已知有28种衍生物。其中，伏马毒素B1（FB1）是最为常见且研究最深入的类型。FB1主要污染源为玉米及其产品，包括动物饲料，且其毒性在所有伏马毒素中最为显著，能够对多种动物造成严峻的毒理影响。研究证实，FB1可能引起马的白脑软化症、猪的肺水肿综合症，甚至与人类的食道癌、肝癌及胃癌等疾病相关，给畜牧业与人类健康带来重大威胁。

2. 技术指标

试剂盒的灵敏度为1ppb(ng/ml)。在25℃下反应所需时间为30至15分钟。对于玉米及饲料样本，其检测下限为150ppb，交叉反应率为伏马毒素B1的100%。饲料的样本回收率为95±15%，而玉米的回收率为100±15%。

3. 试剂盒组成

试剂盒包含以下部分：

• 酶标板（96孔）
• 标准液（黑盖）：各1ml，浓度为0ppb、1ppb、3ppb、9ppb、27ppb、81ppb
• 酶标记物（红盖）：55ml
• 抗体工作液（蓝盖）：55ml
• 底物液A（白盖）：6ml
• 底物液B（黑盖）：6ml
• 终止液（黄盖）：6ml
• 10×浓缩复溶液（黄盖）：50ml
• 20×浓缩洗涤液（白盖）：40ml
• 说明书：1份
• 盖板膜：1张
• 自封袋：1个

4. 需要的器材与试剂

所需仪器包括：酶标仪、打印机、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.001g）。微量移液器为单道20µl-200µl，100µl-1000µl，及多道300µl。

5. 样本前处理

在处理样本前需确保实验器具洁净，并使用一次性吸头，以避免任何污染。

配液说明：

• 复溶液：将10×浓缩复溶液用去离子水10倍稀释。
• 工作洗涤液：将浓缩洗涤液20倍稀释。

样本处理步骤：

1. 处理玉米与饲料样本：称取1g样本于50ml离心管中，加入5ml去离子水，振荡五分钟后，在4000转/分下离心十分钟。
2. 取上清，继续按照说明书要求进行分析。

6. 酶联免疫试验步骤

将所需试剂从冰箱取出，放置室温平衡30分钟，并确保液体摇匀。

1. 编号：为每个样本与标准品标记编号，并记录位置。
2. 加样反应：加入标准品或样本、酶标记物及抗体工作液，然后用盖板膜覆盖，振荡均匀，反应30分钟。
3. 洗涤：小心去掉盖膜，洗涤板孔，确保干净，然后进行下一步操作。
4. 显色：加入底物液A与B，避光摇匀后显色15分钟。
5. 终止反应：加入终止液，轻轻混匀。
6. 测定吸光度：使用酶标仪于450nm下进行测定。

7. 结果分析

紫外光吸光率的计算为样本平均吸光度值与0ppb标准液吸光度的比值，再乘以100%。标准曲线绘制与计算也需严格遵循实验方法。若使用分析软件，将更便于快速及准确的样本分析。

8. 注意事项

实验室温度、洗板过程、试剂新鲜度均可能影响实验结果，请严格遵循说明，不要使用过期试剂或混合不同批次的试剂。同时，避免皮肤接触终止液，确保实验操作安全。

9. 贮藏与保存期

试剂盒应保存于2-8℃，避免冷冻，保质期为1年，具体生产日期见包装。

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